Insulina e IGF-1 no meio extensor de criopreservação seminal bovina / Insulin and IGF-I in extender medium for bovine semen cryopreservation

Objetivou-se avaliar a condição metabólica e estrutural das células espermáticas bovinas após congelação, com adição prévia de IGF-I e insulina no meio diluidor seminal. Os ejaculados de seis touros Nelore foram submetidos a quatro tratamentos: controle; insulina (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) e insulina + IGF-I (50µUI/mL e 75ng/mL, respectivamente). Após a congelação, realizaram-se os testes de termorresistência rápida, coloração pelo corante azul de tripan e Giemsa, além da análise computadorizada da motilidade espermática, da integridade das membranas plasmática e acrossomal, e da peça intermediária por meio de sondas fluorescentes. O teste de termorresistência rápida apresentou efeito dentro do tempo de cada tratamento, mas não entre os tratamentos. Na análise computadorizada da motilidade espermática, foram observados movimento, motilidade e velocidade espermáticos; não houve efeitos dos tratamentos sobre qualquer uma dessas variáveis. Respostas iguais foram obtidas com as sondas fluorescentes e o corante azul de tripan/Giemsa. A adição de insulina e IGF-I, de forma isolada ou combinada, ao meio diluidor para congelação de sêmen não produziu efeitos sobre as condições metabólica e estrutural das células espermáticas.(AU)

This study aimed to evaluate the metabolic and structural condition of the spermatic bovine cells after the freezing, with addition, previously, of IGF-I and Insulin in the seminal thinner medium. The semen of 6 Nellore bulls were submitted to four treatments: Control, Insulin (100µUI/mL); IGF-I (150ng/mL) and Insulin + IGF-I (50µUI/mL and 75ng/mL, respectively). After freezing, rapid resistance tests, Tripan and Giemsa Blue staining, and computerized analysis of sperm motility and integrity of the plasma and acrosomal membranes and the intermediate part were performed by fluorescent probes. The term rapid resistance test had effect within the time of each treatment, but not between treatments. In the computer analysis of sperm motility, sperm movement, motility and velocity no effects of treatments were observed on any of these variables. The same results were obtained with the fluorescent probes and the Blue dye Trypan / Giemsa. The addition of Insulin and IGF-I, alone or in combination, to the semen freezing dilution medium had no effect on the metabolic and structural condition of sperm cells.(AU)

Antioxidant effect on viability of boar semen cooled to 15°C / Influência de antioxidantes na viabilidade do sêmen suíno resfriado a 15°C

This study aimed to evaluate the addition of Vitamin C, reduced Glutathione and trolox on sperm characteristics of pork refrigerated semen. Six pigs were collected through the technique of gloved hand (10 ejaculates/animals). The semen was diluted in MR-A®. After the previous evaluations, the treatments were added: Control group: diluent only; Vitamin C Group: 200µM/mL Vitamin C; Trolox Group: 200µM/mL Trolox; Glutathione group: 2.5mM/ml Reduced glutathione. The semen was stored in thermal boxes and placed inside the refrigerator at 15oC and evaluated at D0, 12, 48, 72 hours. After 30 hours of incubation, each treatment was divided into two equal fractions and the same concentration of antioxidants was added in one of the parts. The results show that reduced glutathione supplementation preserves sperm motility after 24 hours but also has a higher percentage of acrosome intact in the presence of this antioxidant. There was no effect of adding a second dose of the antioxidants. In conclusion, the addition of reduced Glutathione to the swine semen diluent is a promising alternative for better preservation of sperm characteristics and the addition of the second dose of antioxidants during storage is detrimental to semen.(AU)

Este estudo tem como objetivo avaliar a adição da vitamina C, da glutationa reduzida e do trolox sobre características espermáticas do sêmen refrigerado de suínos. Seis cachaços foram coletados pela técnica de mão enluvada (10 coletas/animal). O sêmen foi diluído em MR-A®. Após as avaliações prévias, os tratamentos foram adicionados: grupo controle: apenas diluidor; grupo vitamina C: 200µM/mL de vitamina C; grupo trolox: 200µM/mL de trolox; grupo glutationa: 2.5mM/mL de glutationa reduzida. O sêmen foi armazenado em caixas térmicas e alocado dentro do refrigerador a 15oC e avaliado nos tempos zero, 12, 48 e 72 horas . Após 30 horas de incubação, cada tratamento foi dividido em duas frações iguais e adicionou-se a mesma concentração de antioxidantes em uma das partes. Os resultados demonstram que a suplementação de glutationa reduzida preserva a motilidade espermática após 24 horas, bem como tem maior percentual de acrossoma intacto na presença desse antioxidante. Não houve efeito ao se adicionar uma segunda dose dos antioxidantes. Em conclusão, o acréscimo da glutationa reduzida ao diluidor de sêmen suíno é uma alternativa promissora para melhor preservação das características espermáticas, e a adição da segunda dose dos antioxidantes durante o armazenamento é prejudicial ao sêmen.(AU)

Extrusão de disco intervertebral caudal (coccígea) em um Basset Hound: primeiro relato de caso / First report of caudal intervertebral disk extrusion in a Basset Hound

Relata-se o primeiro caso no Brasil de doença do disco intervertebral (Hansen tipo I) entre as vértebras caudais (coccígeas) em uma cadela Basset Hound com seis anos de idade, castrada, pesando 16kg e com histórico de dor durante defecação e manipulação da região pélvica associada à inabilidade de mover, elevar ou abanar a cauda. Na radiografia simples, observou-se opacidade do forame intervertebral entre a quarta e a quinta vértebra caudal. O animal foi submetido à laminectomia dorsal modificada, seguida de fenestração do disco intervertebral afetado. Decorridos 15 dias da cirurgia, a paciente não demonstrava sinais de dor ao defecar e realizava movimentos de abano de cauda, mas ainda com desconforto na palpação e sem elevação da cauda acima da coluna vertebral, o que foi resolvido após 30 dias do procedimento cirúrgico. A relevância do caso está na inclusão, mesmo que rara, da doença do disco intervertebral caudal no diagnóstico diferencial em cães com dor durante a defecação e manipulação da cauda, sendo o exame radiográfico uma ferramenta auxiliar importante para o diagnóstico definitivo e o plano terapêutico.(AU)

We report here the first case in Brazil of an intervertebral disc disease (Hansen type I) between the caudal vertebrae (coccygeal) in a six-year-old Basset Hound dog, castrated, weighing 16 kg and history of pain during defecation and manipulation of the pelvic region, associated with the inability to move, raise and shake its tail. In the radiography survey, an opacity of the intervertebral foramen between the fourth and fifth caudal vertebra was observed. The animal underwent a modified dorsal laminectomy followed by fenestration of the affected intervertebral disc. After 15 days following surgery, the patient showed no signs of pain when defecating and was able to perform the tail wag movements, but with discomfort on palpation and could not rise the tail high up the spine, which was resolved after 30 days of surgery. The relevance of this report is the inclusion, even if rare, of the caudal intervertebral disc disease in the differential diagnosis in dogs with pain during defecation and handling of the tail, and the radiographic survey is an important auxiliary tool for definitive diagnosis and treatment plan for this disease.(AU)

Sonda uretral flexível como método alternativo para aferição invasiva da pressão intracraniana em trauma cranioencefálico induzido em coelhos / Flexible urethral catheter as alternative method to invasive measurement of intracranial pressure in induced head trauma in rabbits

O objetivo deste estudo foi utilizar a sonda uretral flexível como método alternativo para aferição da pressão intracraniana em coelhos com trauma cranioencefálico induzido pelo cateter de Fogarty 4 Fr (balão epidural) e comparar os dados obtidos com o método convencional de cateter de ventriculostomia. Foram utilizados 12 coelhos, machos, adultos, distribuídos aleatoriamente em dois grupos, denominados de G1: mensuração da PIC com cateter de ventriculostomia (n=6) e G2: mensuração com sonda uretral (n=6). Foram realizadas duas craniotomias na região parietal direita e esquerda para a implantação do cateter de ventriculostomia ou sonda uretral flexível e o balão epidural, respectivamente. A PAM, a PPC, a FC, a FR e a TR foram mensurados antes e após a craniotomia. A PIC foi avaliada após a craniotomia e a cada 10 minutos depois do preenchimento do balonete com 0,3mL de NaCl 0,9%, durante 40 minutos, e com 0,6mL, pelo mesmo período de tempo, totalizando 80 minutos. A PIC aumentou em ambos os grupos, sendo menores os valores registrados com a sonda uretral flexível. Foi possível reproduzir o aumento da PIC com o modelo experimental de TCE utilizando o cateter de Fogarty 4 Fr na região epidural e, embora haja a necessidade de outros estudos, a sonda uretral flexível demonstra ser um método alternativo de mensuração da PIC em coelhos com trauma cranioencefálico.(AU)

The aim of this study was to evaluate the use of flexible urethral catheter as an alternative method for measuring intracranial pressure in rabbits with head trauma induced by 4 F Fogarty catheter (epidural balloon) and compare the data obtained with the conventional method of ventriculostomy catheter. In this study, New Zealand rabbits were randomly distributed into two groups, G1: measuring the ICP with ventriculostomy catheter (n=6) and G2: measuring the ICP with urethral catheter (n=6). Two craniotomies were performed in the right and left parietal region for the implantation of a ventriculostomy catheter and/or flexible urethral catheter and epidural 4 Fr Fogarty arterial embolectomy catheter, respectively. MAP, CPP, HR, RF and RT values were measured before and after of the craniotomy. The ICP value was measured after craniotomy, every five minutes during 40 minutes after the balloon was inflated with 0.3 ml with NaCl and further 40 minutes after the balloon was inflated with 0.6 ml. The ICP value increased in both groups; however, the ICP values were lower in the flexible urethral catheter. The flexible urethral catheter can be used as an alternative method to measure ICP values in rabbits with head injury.(AU)

Herniorrafia diafragmática videoassistida em gato: relato de caso / Videoassisted diaphragmatic hernia repair in a cat: case report

Relata-se um caso de um felino com sinais de dificuldade respiratória havia cerca de 30 dias e emagrecimento progressivo. Ao exame radiográfico torácico e de abdômen, ficou evidenciada perda de definição da linha diafragmática, sendo compatível com hérnia diafragmática. Na laparoscopia, foi observado grande defeito diafragmático, além de estruturas herniadas. Em razão de as vísceras abdominais direcionarem-se ao tórax, dificultando a oclusão do defeito com suturas intracorpóreas, optou-se pela realização de incisão paracostal, procedendo-se à herniorrafia por celiotomia reduzida. A videolaparoscopia permitiu localizar o local herniado e promover a redução dos órgãos envolvidos com mínimo trauma operatório. Logo, mostrou-se como eficaz ferramenta diagnóstica e auxiliar no tratamento de hérnias diafragmáticas crônicas de grande dimensão em gato.(AU)

This is a case report of a cat with signs of respiratory distress for about 30 days and progressive weight loss. The thoracic radiograph and abdomen examination evidencing loss of definition of the diaphragmatic line is compatible with diaphragmatic hernia. In laparoscopy, a large diaphragmatic defect and herniated structures were observed. Since abdominal viscera point towards the chest making occlusion of defective intracorporeal sutures difficult, paracostal incision proceeding to hernia repair by short celiotomy was chosen. Laparoscopy allows for location of herniated place and promotes the reduction of organs involved with minimal surgical trauma. Therefore, it was shown to be an effective diagnostic tool and an aid in the treatment of chronic diaphragmatic hernias of large size in a cat.(AU)

Gemistocytic astrocytoma in the spinal cord in a dog: a case report / Astrocitoma gemistocítico medular em cão: relato de caso

This paper reports a case of a rare variant of the cervical spinal cord astrocytoma diagnosed in a dog with progressive neurological signs, initially asymmetrical, not ambulatory tetraparesis, segmental reflexes and normal muscle tone in all four limbs and absence of pain upon palpation of the cervical spine. Myelography revealed attenuation of the ventral and dorsal contrast line in the third region of the fifth cervical vertebra. At necropsy intramedullary cylindrical mass that stretched from the third to the sixth cervical vertebra, which replaced all the gray matter of the spinal cord was observed. In the histological study, there was the replacement of the substance by neoplastic cells mantle arranged loosely. The cells were large and slightly rounded. The eosinophilic cytoplasm was well defined, sometimes forming processes interconnecting cells. The nucleus was eccentric, round, oval or kidney-shaped, and the nucleolus was evident. Thus, the microscopic changes observed in the cervical spinal cord were consistent with gemistocytic astrocytoma.(AU)

Relata-se um caso de uma variante rara de astrocitoma na medula cervical, diagnosticado em cadela com sinais neurológicos progressivos, inicialmente assimétricos, de tetraparesia não ambulatória, com reflexos segmentares e tônus muscular normais nos quatro membros e ausência de dor à palpação da coluna cervical. A mielografia revelou atenuação da linha de contraste ventral e dorsal na região da terceira à quinta vértebra cervical. À necropsia, foi observada massa cilíndrica intramedular que se estendia da terceira à sexta vértebra cervical, a qual substituía toda a substância cinzenta da medula espinhal. No estudo histológico, observou-se substituição da substância por manto de células neoplásicas arranjadas frouxamente. As células eram grandes e levemente arredondadas. O citoplasma eosinofílico, bem delineado, por vezes formava processos interligando as células. O núcleo era excêntrico, redondo, oval ou reniforme, e o nucléolo evidente. Logo, as alterações microscópicas observadas na medula espinhal cervical foram compatíveis com astrocitoma gemistocítico.(AU)

Meloxicam associado ou não ao tramadol no controle da dor após ovário-histerectomia videoassistida em cadelas / Meloxican with or without tramadol for control of pain undergoing laparoscopic-assisted ovariohysterectomy in bitches

O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia do meloxicam associado ou não ao tramadol, no controle da dor após ovário-histerectomia (OVH) laparoscópica com dois portais. Foram selecionadas 14 cadelas hígidas. Os animais foram separados de forma aleatória, em dois grupos. O grupo M (GM) recebeu meloxicam (0,2mg kg-1, s.i.d.), enquanto os animais do grupo MT (GMT) receberam a associação de meloxicam (0,2mg kg-1, s.i.d.) e tramadol (4mg kg-1, t.i.d.), ambos durante dois dias de pós-operatório. Para avaliação da dor pós-cirúrgica, foram utilizadas as escalas de Melbourne e escala visual analógica (EVA), além de mensurações de glicemia e cortisol sérico. Não houve diferença ao se avaliarem os grupos GM e GMT pela escala de Melbourne nem pela EVA. As mensurações de cortisol não atingiram valores superiores aos de referência para a espécie, enquanto os valores de glicemia não apresentaram variação significativa ao longo do tempo de avaliação nem entre grupos. Com os resultados deste estudo, foi possível concluir que a utilização de meloxicam associado ou não ao tramadol, nas doses e posologias propostas, é eficaz para controlar a dor pós-operatória de cadelas submetidas à OVH laparoscópica com dois portais.

The aim of this study was to evaluate the efficacy of meloxicam with or without tramadol for pain control after laparoscopic-assisted ovariohysterectomy (OVH) by two-portal access. Were selected 14 healthy dogs to perform video-assisted OVHs. The animals were divided randomly into two groups (GM and GMT). The GM group received meloxicam (0.2mg kg-1, s.i.d), whereas the GMT group received the combination of meloxicam (0.2mg kg-1, s.i.d) and tramadol (4mg kg-1, tid), both for two days after surgery. To evaluate the post-surgical pain Melbourne and EVA scales were used, and blood glucose and serum cortisol were measured. There was no statistical difference when evaluating GM and GMT groups and the Melbourne scale or the visual analogue scale VAS. Cortisol measurements did not reach values higher than the reference for the species, while blood glucose levels did not present significant statistical variation throughout the evaluation time or between groups. With these results, we concluded that the use of meloxicam with or without the tramadol at the doses and dosage schedules proposed, is effective to control postoperative pain in bitches that had undergone video-assisted OVH with two-portal access.

Heating produced by therapeutic ultrasound in the presence of a metal plate in the femur of canine cadavers / Aquecimento gerado pelo ultrassom terapêutico em presença de placa óssea metálica no fêmur de cadáveres caninos

The present study aimed to assess the heat generated by a therapeutic ultrasound (TUS) in a metal bone plate and adjacent structures after fixation to the femur of canine cadavers. Ten pairs of hind limbs were used, and they were equally distributed between groups that were subjected to 1- and 3-MHz frequencies, with each frequency testing 1- and 2-W/cm² intensities. The right hind limb was defined as the control group (absence of the metal plate), and the left hind limb was the test group (presence of the metal plate). Therefore, the control groups (CG) were denominated CGI, using TUS with 1-MHz frequency and 1-W/cm² intensity; CGII, using 1-MHz frequency and 2-W/cm² intensity; CGIII, using 3-MHz frequency and 1-W/cm² intensity; and CGIV, using 3-MHz frequency and 2-W/cm² intensity. For each control group, its respective test group (TG) was denominated TGI, TGII, TGIII and TGIV. The TUS was applied to the lateral aspect of the thigh using the continuous mode and a 3.5-cm² transducer in a 6.25-cm² area for 2 minutes. Sensors were coupled to digital thermometers that measured the temperature in different sites before (t0) and after (t1) of the TUS application. The temperatures in t1 were higher in all tested groups. The intramuscular temperature was significantly higher (P<0.05) in the groups used to test the 3-MHz frequency in the presence of the metal plate. The therapeutic ultrasound in the continuous mode using frequencies of 1 and 3 MHz and intensities of 1 and 2 W/cm2 for 2 minutes caused heating of the metal plate and adjacent structures after fixation to the femur of canine cadavers...

O objetivo deste estudo foi avaliar o aquecimento gerado pelo ultrassom terapêutico (UST) na placa óssea metálica e estruturas adjacentes após a fixação no fêmur de cadáveres caninos. Foram utilizados dez pares de membros pélvicos, distribuídos igualmente entre os grupos que utilizaram as frequências de 1 e 3 MHz. Cada frequência testou as intensidades de 1 e 2 W/cm², sendo que o membro pélvico direito foi definido grupo controle (ausência da placa óssea metálica) e o membro pélvico esquerdo o grupo teste (presença da placa óssea metálica). Portanto, os grupos controles foram denominados GCI, com UST na frequência de 1 MHz e intensidade de 1 W/cm²; GCII, com 1 MHz e 2 W/cm²; GCIII, com frequência de 3 MHz e intensidade de 1 W/cm²; e GCIV, com 3 MHz e 2 W/cm². Para cada grupo controle, seu respectivo grupo teste foi denominado GTI, GTII, GTIII e GTIV. O UST foi aplicado na face lateral da coxa, utilizando o modo contínuo, transdutor de 3,5cm², em uma área de 6,25cm², durante dois minutos. Foram utilizados sensores acoplados a termômetros digitais que mediram a temperatura em diferentes locais antes (t0) e após (t1) a aplicação do UST. Pode-se verificar que as temperaturas em t1 foram maiores em todos os grupos testados. Os grupos que testaram a frequência de 3 MHz demonstraram que a temperatura intramuscular foi significativamente maior (P<0,05) na presença da placa óssea metálica. O ultrassom terapêutico no modo contínuo de 1 e 3 MHz e intensidades de 1 e 2 W/cm2 durante dois minutos promove o aquecimento da placa óssea metálica e estruturas adjacentes após a fixação no fêmur de cadáveres caninos...

Sphingosine 1-phosphate promotes activation of aprine preantral follicle in vitro / Esfingosina 1-fosfato promove ativação de folículos pré-antrais de caprinos in vitro

This study describes the effect of sphingosine 1-phosphate (S1P) for development of preantral follicle, therefore the activation and follicular viability of caprine follicles cultured in vitro. Ovarian fragments were cultured for 1 or 7 days in Minimum Essential Medium with different S1P concentrations (0, 1, 10, 50, 100 or 200ng/mL). All ovarian fragments were processed for histological analysis in optical microscopy, transmission electron microscopy and fluorescence analysis. The treatment using 1ng/mL of S1P was able to maintain the percentage of normal follicles with the progression of the culture from day 1 to 7. At end of the 7-day culture period there was a significant reduction (P<0.05) in the percentage of primordial follicles in all groups treated with S1P, compared with fresh control (FC) and Control Culture (CC), which was followed by an increase of activated follicles (intermediary, primary and secondary). In addition, the culture for 7 days with media supplemented with S1P with 1ng/mL preserved the ultrastructure of organelles and kept the preantral follicular viability when evaluated by fluorescence microscopy. In conclusion, after 7 days of culture, the 1ng/mL of S1P activates the development of preantral caprine follicles, cultured in situ and maintains the oocitary and follicular viability...

Este estudo descreve o efeito da esfingosina 1-fosfato (S1P) no desenvolvimento de folículos pré-antrais, portanto da ativação e viabilidade de folículos caprinos cultivados in vitro. Fragmentos de ovários foram cultivados por um ou sete dias em meio essencial mínimo com diferentes concentrações de S1P (0, 1, 10, 50, 100 ou 200ng/mL). Os fragmentos de ovário foram processados para análise histológica em microscopia óptica, microscopia eletrônica e microscopia de fluorescência. O tratamento usando 1ng/mL de S1P foi capaz de manter a porcentagem de folículos normais durante o período de cultivo de sete dias. Ao final do período de cultivo, houve uma redução significativa (p<0,05) na porcentagem de folículos primordiais em todos os grupos tratados com S1P, comparados com os grupos controle (FC e CC), seguida por um aumento do número de folículos ativados (intermediários, primários e secundários). Adicionalmente, na cultura por sete dias com meio suplementado com S1P (1ng/mL), houve preservação da ultraestrutura das organelas e manteve-se a viabilidade dos folículos pré-antrais avaliados por microscopia de fluorescência. Em conclusão, após sete dias de cultura, o meio suplementado com 1ng/mL de S1P ativa o desenvolvimento de folículos pré-antrais de caprino, cultivados in situ e mantém as viabilidades oocitária e folicular...

Transforming growth factor-β (TGF-β) maintains follicular ultrastructure and stimulates preantral follicle growth in caprine ovarian tissue cultured in vitro / Fator de crescimento transformante-β (TGF-β) mantém a ultraestrutura folicular e estimula o crescimento de folículos pré-antrais caprinos inclusos em tecido ovariano cultivado in vitro

The objectives of this study were to investigate whether TGF-β affect the survival, activation and further growth of goat primordial follicles enclosed in ovarian cortex after in vitro culture. Goat ovaries were collected from an abattoir and pieces of ovarian tissues were cultured for one or seven days in a supplemented alpha Minimum Essential Medium, alone or containing TGF-β (1, 5, 10 or 50ng/mL). Ovarian tissues from the fresh control as well as those cultured were processed for histological and ultrastructural studies. The results showed that when compared with fresh control, there was decrease in the percentages of histologically normal follicles in all treatments only after seven days culture. TGF-β did not affect the activation of preantral follicles regardless of its concentration, however, larger follicles diameter (P<0.05) was observed using 10ng/mL TGF-β than in the fresh control and other treatments. Moreover, this concentration maintained the normal ultrastructure after seven days of culture. In conclusion, TGF-β showed additional effect on the follicle growth and the maintenance of ultrastructural integrity of goat preantral follicles enclosed in ovarian tissue when used at 10ng/mL during seven days of culture...

O objetivo desse estudo foi investigar se o TGF-β afeta a sobrevivência, ativação e crescimento de folículos primordiais caprinos inclusos no córtex ovariano após o cultivo in vitro. Ovários de cabras foram coletados em abatedouro e fragmentos de tecido ovariano foram cultivados por um e sete dias em meio essencial mínimo alfa (α-MEM+) sozinho ou suplementado com TGF-β (1, 5, 10 ou 50ng/mL). Fragmentos ovarianos não cultivados e cultivados foram processados para análise histológica e ultraestrutural. Os resultados mostraram que, comparado ao controle fresco, houve diminuição no percentual de folículos morfologicamente normais em todos os tratamentos somente após sete dias de cultivo. O TGF-β não afetou a ativação folicular independente da concentração testada, contudo, o diâmetro folicular foi superior (P<0.05) no tratamento com 10ng/mL de TGF-β quando comparado ao controle fresco e aos demais tratamentos. Além disso, essa mesma concentração manteve a ultraestrutura normal dos folículos após sete dias de cultivo. Em conclusão, o TGF-β apresentou efeito adicional no crescimento folicular e na manutenção da integridade ultraestrutural de folículos pré-antrais caprinos inclusos no tecido ovariano quando utilizado na concentração de 10ng/mL durante sete dias de cultivo...

Interaction between growth differentiation factor 9, insulin-like growth factor I and growth hormone on the in vitro development and survival of goat preantral follicles

The objective of this study was to determine the effects of GDF-9, IGF-I, and GH alone or combined on preantral follicle survival, activation and development after 1 and 7 days of in vitro culture. Either fresh (non-cultured) or cultured ovarian tissue was processed for histological and fluorescence analysis. For all media tested, the percent of normal follicles was greater when compared to minimum essential medium supplemented (MEM+) alone, except when ovarian tissue was cultured with GDF-9/IGF-I or GDF-9/GH (P < 0.05). Fluorescence analysis showed that the percent of viable follicles after 7 days of culture was similar for non-cultured tissue and for all treatments tested. The percent of primordial follicles was reduced (P < 0.05) and there was a significant and concomitant increase in the percent of intermediate and primary follicles in all treatments tested after 7 days of culture when compared to non-cultured tissue. After 7 days of culture, the highest percent of intermediate follicles was observed with IGF-I/GH (61.3 percent), and the highest percent of primary follicles was achieved with IGF-I (57.7 percent). After 7 days of culture in MEM+ containing GDF-9, IGF-I and GH alone or in all associations, a significant increase in follicular diameter was observed when compared to MEM+ alone and non-cultured tissue. In conclusion, GDF-9, IGF-I and GH alone or in combination maintain preantral follicle survival and promote primordial follicle activation. Nevertheless, the data showed that IGF-I/GH and IGF-I alone are efficient in promoting the transition from primordial to intermediate follicles and from intermediate to primary follicles, respectively.

Chromosomal organization of simple sequence repeats in the Pacific oyster (Crassostrea gigas): (GGAT)(4), (GT)(7) and (TA)(10) chromosome patterns.

Chromosome identification is essential in oyster genomic research. Fluorescence in situ hybridization (FISH) offers new opportunities for the identification of oyster chromosomes. It has been used to locate satellite DNAs, telomeres or ribosomal DNA sequences. However, regarding chromosome identification, no study has been conducted with simple sequence repeats (SSRs). FISH was used to probe the physical organization of three particular SSRs, (GGAT)(4), (GT)(7) and (TA)(10) onto metaphase chromosomes of the Pacific oyster, Crassostrea gigas. Hybridization signals were observed in all the SSR probes, but the distribution and intensity of signals varied according to the oligonucleotide repeat. The intercalary, centromeric and telomeric bands were observed along the chromosomes, and for each particular repeat every chromosome pair presented a similar pattern, allowing karyotypic analysis with all the SSRs tested. Our study is the first in mollusks to show the application of SSR in situ hybridization for chromosome identification and karyotyping. This technique can be a useful tool for oyster comparative studies and to understand genome organization in different oyster taxa.

Chromosomal evolution and phylogenetic analyses in Tayassu pecari and Pecari tajacu (Tayassuidae): tales from constitutive heterochromatin.

The mammalian family Tayassuidae (peccaries) is confined to the New World and comprises three recognized extant species, white-lipped (Tayassu pecari), collared (Pecari tajacu) and chacoan (Catagonus wagneri) peccaries, which exhibit distinct morphological and chromosomal features. The phylogenetic relationships among the tayassuids are unclear and have instigated debate over the palaeontological, cytogenetic and molecular aspects. Constitutive heterochromatin analysis can be used in understanding the phylogenetic relationships between related species. Here we describe, for the first time, the constitutive heterochromatin (C-positive heterochromatin) of two tayassuid species, Tayassu pecari and Pecari tajacu. We demonstrate that in situ restriction endonuclease digestion with sequential C-banding could be a complementary tool in the study of constitutive heterochromatin heterogeneity in chromosomes of the Tayassuidae. Our characterization of peccary chromosomes suggests that the Pecari tajacu autosomal karyotype is more primitive and has accumulated great diversity in its constitutive heterochromatin. This idea is supported by several other studies that analysed nuclear and mitochondrial sequences of the living peccary species. Finally, the tayassuid X chromosome primitive form seems to be the one of Tayassu pecari.

Determinacion de niveles de vitamina D y su relacion con la densidad mineral osea (DMO) en mujeres perimenopausicas / Vitamin D and Bone mineral density of perimenopause women

Objetivos. Conocer en nuestro medio los niveles de vitamina D en mujeres durante el climaterio y su diferencia en los casos de osteopenia / osteoporosis confirmados por osteodensitometría. Muestra. Se tomaron 27 pacientes que consultaron por síndrome climaterio a la Clínica de Climaterio del Instituto Materno Infantil (IMI) de Bogotá durante 1999: 3 osteoporóticas, 12 osteopénicas y 12 normales por osteodensitometría de acuerdo a los parámetros establecidos por la Asociación Internacional de Osteoporosis.Metodología. Se utilizó la técnica de radioinmunoanálisis para la determinación cuantitativa de 1,25 (OH)2D2 en plasma humano, utilizando el kit Gamma b1, 25 dihydroxyvitamin de la casa IDS, por medio de inmunoextracción. Sensibilidad - 2 Desviaciones estándar de 10 replicas del calibrador cero (5 pmol/L). Valor de referencia 46- 110 pmol/L. Estos datos se compararon con la Densidad Mineral Osea (DM0) medida por densitometría a nivel de columna lumbar (L4) y fémur, considerando como osteoporosis un T-score de -2.5. Para el cálculo de la muestra se utilizó la prueba de T (22 grados de libertad), asumiendo igualdad de varianzas. Resultados: El promedio para el grupo es 81.7 +18.9 pmol/L. El 68 por ciento de la muestra se encuentra entre 62.7 y 100.6 pmol/L dentro del promedio de lo esperado. El promedio de las mujeres normales es de 100.4 + 13.56 pmol/L y las osteopénicas de 66.96 + 9.5 pmol/L estos valores representan una disminución del 33 por ciento cuando se comparan las mujeres normales frente a las osteopénicas. Existe una diferencia significativa p< 0.001 entre las de DM0 normales y las osteopénicas

Fito y bioanálisis de algunas plantas utilizadas en medicina popular con posible actividad farmacológica / Phyto and Bioassay of some plants utilized in popular medicine with possible activity pharmacology

El bioanálisis de 29 especies medicinales y seis sustancias patrones para determinar la CL 50 por el método de Artemia salina, demostró que 22 de las 29 plantas estudiadas presentan CL 50 menor a 500µg/ml. Las especies que presentan CL 50 menor a 100 µg/ml son Lantana camara, Bauhinia picta, Pitiviria alliacea, Caléndula officinalis, Rumex obtusifolius, Salvia palaefolia, taraxacum officinale, Senecio formosus, Malvia rotundifolia, Solanum nigrum y Plantago major. Según el análisis fitoquímico en el presente trabajo la mayoría de las plantas estudiadas presentan alcaloides, esteroles, triterpenos, flavonoides, taninos y saponinas. Los derivados de antraquinonas se encontraron únicamente en Rumex obtusifolius